重组蛋白定制服务

众所周知,在知道某蛋白的基因编码序列之后,可人工克隆该基因进入质粒,然后再把质粒转染入大肠杆菌。这样大肠杆菌就成了蛋白表达的工厂,表达出来的蛋白再进过分离纯化,就是重组蛋白。当然,大肠杆菌表达系统只是获得重组蛋白的其中一种表达系统,还有其他真核表达系统。图1为重组蛋白表达过程。

云克隆为您提供从基因到蛋白的一站式服务,客户也可以根据自身的需求灵活的选择服务项目或个性化的定制服务。重组蛋白的获得的前提是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白。云克隆目前拥有原核(E.coli)表达系统与真核(酵母、杆状病毒一昆虫细胞、哺乳动物细胞)表达系统的重组蛋白表达平台。我们将在不断创新和改进的基础上,始终致力于为每一位客户提供最全面、最优质的服务。

现针对各个表达系统及其相关技术优势,向大家展开详细介绍:

原核表达系统:原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统,也是最经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠,得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母表达系统:酵母蛋白表达系统以甲醇毕赤酵母为代表,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近高等真核生物,分泌蛋白易纯化,易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解,表达量不可控。

杆状病毒-昆虫表达系统:杆状病毒常用的表达宿主有来源于草地贪夜蛾的Sf9、Sf21和来源于粉纹夜蛾的High-Five、Tn-368,这些细胞质生长较快,能够达到较高的细胞密度,适应悬浮培养,可以使用无血清培养基,是重组蛋白表达的理想宿主。

哺乳动物表达系统:与其它系统相比,哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠,提供复杂的N-糖基化和准确的O-糖基化等多种翻译后加工功能,因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的蛋白质分子。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式,最容易保留生物活性,缺点是表达量通常较低,稳定细胞系建立技术难度大,生产成本高。 

除此之外,我们还可为您定制的蛋白提供如下增值服务:

1)多种纯化方式的选择

2)快速去内毒素技术

3)柱上标签切除技术

4)一步高效纯化技术

5)包涵体复性

6)EASYFOLD技术

重组蛋白定制常规流程:

基因克隆或者基因合成 →亚克隆质粒构建 →表达质粒构建 →表达条件优化 →蛋白表达 →蛋白纯化 →后期处理(去除内毒素、融合标签切除、活性测定等)。

云克隆科技股份有限公司经过多年的技术累积,现可为您提供11000余种蛋白,满足您的各类需求!如需进行重组蛋白定制业务,欢迎来电垂询。


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