• 慢病毒和腺病毒表达系统

    借助于病毒颗粒作为基因的载体,利用病毒的侵染特性,自发的侵染哺乳动物细胞,将目的基因导入哺乳动物细胞中,以完成目的产物的超量表达或干涉。该技术目前在基因、小RNA、转录因子等功能验证领域以及重组蛋白表达、转基因哺乳动物制备等领域作为一种主要的技术手段被广泛使用。该技术体系主要由病毒包装和病毒侵染筛选两个部分组成(如图所示)。病毒包装就是借助基因工程的方法将目的基因片段与人为改造病毒的基因组通过特殊的位点连接起来形成重组病毒基因组以及重组病毒制备的过程,常规使用的病毒包装系统有慢病毒包装系统和......
  • 蛋白/抗体的常用标记方法介绍

    为研究蛋白的性质、含量、结构与功能,以及为了方便对抗原抗体特异性结合的实验现象进行观察和检测,通常会选择利用一些易测定又具有高度敏感性的物质作为标记物标记抗原,然后通过检测这些标记物的增强放大效应而产生的颜色变化、光谱变化等来达到研究目的。即利用抗原中氨基酸残基的特殊理化性质,在特定的条件下使蛋白/抗体与标记物结合,形成蛋白/抗体标记物。标记抗原原理示意图如下:标记蛋白一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及C13和N15全蛋白标记等方式。标记抗体一般可采用酶标记、生物素标记、荧光标记以及胶体金......
  • PD-1/PD-L1与癌细胞的对决

    PD-1是程序性死亡分子1,由PDCD1基因编码。PD-1有两个小伙伴:一个是大家熟知的PD-L1,另一个是PD-L2。 PD-L1和PD-L2都是PD-1的配体,PD-1主要表达在免疫细胞上,PD-L1表达在肿瘤细胞上,而PD-L2主要表达在树突细胞上。相比于PD-L1,PD-L2的表达范围较窄,研究也较少。所以此次主要介绍PD-L1和PD-1。首先让我们来了解一下PD-1/PD-L1与癌细胞的关系如何。癌细胞逃避人体免疫系统的方式之一是将T细胞免疫应答关闭。主要体现形式之一是利用可以在各种肿瘤组织中表达的配体PD-L1交联T细胞上的PD-1受体,PD-1与PD-L1结合后可提供抑制性信......
  • 细胞自噬标志物LC3

    一年一度的诺贝尔奖如期拉开帷幕,2016年诺贝尔生理学或医学奖授予了日本科学家大隅良典,以表彰他对细胞自噬机理的发现。早在上世纪50年代,比利时科学家杜夫通过电镜观察到自噬体结构,并首先提出了“自噬”这种说法。自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物的过程,以实现细胞稳态和细胞器更新。这个过程以溶酶体封闭小室为终点结束。图1即形象地描述了细胞自噬的机理。通俗地说,细胞可以通过降解自身的非必需成分来提供能量和营养,也可以降解一些毒性成......