ELISA检测细胞自噬，下一个hot spot
自噬（autophagy）是由 Ashford 和 Porter 在 1962 年发现细胞内有“自己 吃自己”的现象后提出的，是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜 包 裹 部 分 胞 质 和 细 胞 内 需 降 解 的 细 胞 器 、 蛋 白 质 等 成 分 形 成 自 噬 体 （autophagosome），并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物， 以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬是继凋亡（apoptosis）后， 当前生命科学最热的研究领域之一，根据 Pubmed 记录的文献数量，2006 年以 前其相关文献大约 1500 条。2007 年至 2010 年 9 月其相关文献发表量达到大约 4400 条。
但是，关于自噬的检测，一直是研究者们头痛的一个问题。细胞自噬的金 标准是在电镜下观察到被称为 Phagophore 的吞噬泡，如图 1 所示，在自噬不同 时期可观察到不同形态的吞噬泡。虽然电镜可直接观察到自噬，但由于需要电 镜设备和一定的实验技能，其无法满足所有研究者的需要。因此，常规还可利 用 LC3 的抗体，通过 Western Blot 检测 LC3-II/I 比值的变化以评价自噬的发生发 展。当自噬形成时，胞浆型 LC3 会酶解掉一小段多肽形成 LC3-I，LC3-I 跟 PE 结合转变为（自噬体）膜型（即 LC3-II）。
图 1. 透射电镜下观察不同时期的自噬泡 (源引自：Madame Curie Bioscience Database)
除此之外，GFP-LC3 单荧光体系和 mRFP-GFP-LC3 双荧光体系也广泛应用 于自噬检测中。通过转染或感染等方法，研究者可将 GFP-LC3 表达于目标细胞 中，再通过荧光显微镜下观察 GFP 的数量、强弱等来对细胞的自噬形成来进行 检测。
随着近年来酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)技术的发展，研究者们发现通过 ELISA 的方法检测自噬相关基因，也可 很方便地对细胞的自噬情况进行评价。自噬相关基因(autophagy associated gene, ATG)，顾名思义，是指直接参与或调节自噬相关过程的基因，目前已发现 的 ATG 有 16 种，命名从 ATG1-ATG16，其中 ATG8 也被称为 LC3，ATG6 也被 称为 Beclin-1。 Cloud-Clone Corp.据此开发一系列的 ATG 蛋白检测试剂盒，包 括 ATG12 检测试剂盒（SEL224Hu）、ATG16L1 检测试剂盒（SEN942Hu）、 ATG5 检测试剂盒（SEL221Hu）、ATG7 检测试剂盒（SEL222Hu）、BECN1 检测试剂盒（SEN942Hu）、ATG16L1 检测试剂盒（SEN942Hu）、ATG16L1 检测试剂盒（SEJ557Hu）等。这些产品均为科研用户研究自噬相关机制提供了 良好的实验平台。
与其它检测手段相比，ELISA 检测细胞自噬具有简便、省时、无需电镜或 荧光显微镜等大型仪器、可同时检测多个样品等优点，为研究自噬的机理提供 了更方便的产品支持。
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