半胱天冬酶Caspase-1酶联免疫检测试剂盒应用于ATP 与LPS共激活的单核细胞中Caspase-1的定量测定
Caspase家族作为细胞凋亡过程中的中心环节和执行者，与细胞凋亡等形态学特征密切相关，近年来受到了广泛的关注。Caspase-1是Caspase 家族第一个被发现的蛋白，早在1992年人类就克隆并测序其cDNA，随后Caspase家族相继共有14个成员被克隆出。Caspase-1作为凋亡机制中重要的效应成分，主要参与细胞因子介导的炎症反应并在死亡受体介导的细胞凋亡途径中起辅助作用，参与IL- 1β 的成熟和转运，同时还参与凋亡有关的生理和病理过程，在诸如生长因子、热休克、细胞因子和DNA损伤剂等刺激作用下，共同介导细胞内多种凋亡信号传导途径。
近年来有关Caspase-1的表达研究十分的活跃，其中的研究热点就是ATP及脂多糖LPS共激活Caspase-1的表达。图1是ATP及LPS共激活的信号通路（参考Animal Biotechnology），从中可以看到，当给予ATP 及LPS刺激作用于单核细胞后，可以提高位于细胞膜上的受体蛋白P2X7的表达量，从而导致ca离子内流，k离子外流，这种离子流进一步激活NLRP3蛋白的表达，从而激活pro-caspase-1的蛋白表达量，进而提高Caspase-1的表达量。
Cloud-Clone Corp.公司研制的Caspase-1酶联免疫检测试剂盒(SEB592Hu)可准确定量检测THP-1细胞中Caspase-1的含量。
图1：ATP及LPS共激活Caspase-1的信号通路
实验方案：
一，ATP诱导激活Caspase-1的表达
1）收集人的单核细胞THP-1，加入基础培养基RPMI1640，37℃，5%CO2培养箱中过夜培养细胞使其浓度达到106/ml，再加入1ml RPMI1640培养基，过夜培养。
2）过夜培养12h的细胞，加入终浓度为1ug/ml的LPS，刺激培养3h后，再次加入终浓度为5mM的ATP溶液（100mM，pH =7）激活培养2h。
二，THP-1细胞上清及内含物的收集
培养好的细胞，收集细胞上清及细胞。对于上清液，1000g离心20分钟，将上清用于后续的含量检测。细胞内含物，先用预冷的PBS洗3次，用物理（超声破粹或者反复冻融）或者化学方法（细胞裂解液）裂解细胞，1000g离心20分钟，取上清进行检测。
三，Caspase-1的定量检测
分别取上清溶液，使用半胱天冬酶Caspase-1酶联免疫检测试剂盒(SEB592Hu)定量检测样本中Caspase-1的含量。
实验结果：
ATP及LPS处理THP-1细胞后，细胞上清和细胞裂解液中的Caspase-1的表达量如图2所示：
THP-1细胞在加入ATP及LPS处理后，细胞上清和细胞裂解液中的Caspase-1的表达量均增加，尤其是细胞裂解液中的Caspase-1的表达量明显高于未处理组， Caspase-1的表达量大约增加了24倍，这也很好的佐证了Caspase-1定位表达于THP-1细胞内的相关研究。