活化的caspase 3的检测
Caspase (Cysteine aspartic acid specific protease，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年发现的一组存在于细胞质中，活化位点均含有半胱氨酸，且特异性断开天冬氨酸残基后肽键的蛋白酶。Caspase在细胞程序性死亡（又称凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今为止，已经发现的人的caspase家族成员已达12种。
Caspase 3 是caspase家族的一个重要成员，其在细胞凋亡过程中作为最主要的终末剪切酶行使作用。该蛋白由pro-caspase 3 酶原经过进一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一个含有277个氨基酸残基的前体蛋白，对其结构进行分析，可以分为以下四个部分：第一部分是含有第1-9aa的前肽，第二部分是含有第10-28aa的前肽，第三部分是包含29-175aa的大亚基，称为p17，第四部分是包含176-277aa的小亚基，称为p12 (图1)。在凋亡开始时，pro-caspase3酶原可以被内源性的颗粒酶B和外源性的细胞色素C等因素激活，使其在Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切，形成p17和p12两个亚基。此后，两种亚基再组成具有活性的caspase 3，活化的caspase 3是含有2个p17亚基和2个p12亚基的异源四聚体，它可以通过对其主要的底物：多聚 (二磷酸腺苷-核糖)聚合酶 (poly (ADP-ribose)polymerase, PARP) 等进行剪切而诱导细胞凋亡的进行。
由于Caspase 3在凋亡过程中行使重要作用，并且其需要以活化的形式发挥功能，所以，对活化的caspase 3以及其活性的检测就十分重要，Cloud-Clone Corp.公司针对Caspase 3的两个亚基分别进行了序列分析、基因克隆和蛋白表达，获得
了Caspase 3的两个亚基的蛋白，其货号分别为：RPA626Hu01和RPA626Hu02。在细胞凋亡的研究过程中，研究者可以同时使用p17 (RPA626Hu01) 和p12 (RPA626Hu02)这两种亚基蛋白，使其在试验体系中组装成为活化的Caspase 3，并发挥其在细胞调亡过程中的作用。
用这两种蛋白作为免疫原分别免疫小鼠和兔后，获得了单克隆抗体 (MAA626Hu22) 和多克隆抗体 (PAA626Hu01, PAA626Hu02)。这些抗体可用于对pro-caspase 3的活化程度的定量或半定量检测。图2是一组通过Western blot对pro-caspase 3和p17／p12亚基含量的对比分析来确定Caspase3在实验过程中活化的进程和速度的实验数据。
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