裸鼠HepG2细胞皮下成瘤与肝内成瘤的实验研究

原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,据统计,肝癌年死亡率占所有肿瘤年死亡率的第二位,我国肝癌发病率及死亡率更是居世界之首,占每年肝癌新发病率及死亡人数的55%,且有逐年增加的趋势。因其恶性程度高,侵袭性强,生长快,易复发转移等生物学特性,被称为“癌中之王”。尽管目前各种手术、化疗等治疗手段在不断提高,但效果仍欠佳。近年来,随着分子生物学技术、基因组学的蓬勃发展,肝癌的基因治疗已成为当前肝癌治疗研究的热点。

建立肿瘤动物模型是研究肿瘤发病机制及开展肿瘤治疗相关研究的重要手段。动物模型应该尽可能的接近人类肿瘤的自然生物学过程,包括肿瘤的发生、发展、浸润和转移。建立良好的肝癌动物模型对于模拟人体肝癌形成及抗肿瘤免疫应答研究具有很好的替代作用。

目前实验室中常用的是移植型肝癌模型,移植型模型根据移植瘤所在部位可分为原位型和异位型。通过向裸鼠肝脏注射肝癌细胞建立肝脏原位肿瘤模型,观察其原位成瘤的过程及状态,能较好的模拟人体肝癌生长过程,为进一步抗肝癌免疫研究提供实验动物模型;而异位型多见于在实验动物背部皮下注射一定量的肝癌细胞形成肿瘤,皮下瘤操作简单容易掌握,成功率高,且肿瘤体积变化易于测量,容易给予局部干预。

武汉云克隆可为您提供裸鼠肝内成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验模型,并可根据您的具体要求完成相应的后续实验。

裸鼠肝脏原位成瘤实验方法:

1)将标准条件下培养的处于对数生长期的荧光素酶基因标记的肿瘤细胞人肝癌细胞株HepG2-luc消化、离心,将所得的约5×106个细胞溶于0.1 mL DMEM培养液待用。

2)使用3%戊巴比妥钠麻醉小鼠(SPF级无胸腺Balb/C-nude裸鼠,雄性,周龄为4~5周,体重为15g~20g),待麻醉生效后,开腹暴露肝脏,用1ml胰岛素注射针取准备好的细胞注射于裸鼠肝脏内,用5-0丝线缝合伤口,活力碘消毒伤口,将裸鼠放在加热垫上,待清醒后正常饮食饲养。

3)荧光活体成像检测:在成瘤后对裸鼠进行荧光活体成像检测,成像前使用3%戊巴比妥钠麻醉小鼠,再通过腹腔注射3mg底物luciferin,底物注射10分钟后进行荧光活体成像检测。图1为裸鼠HepG2-luc细胞肝脏原位注射1周后荧光活体成像图。

4)四周后颈椎离断,处死小鼠,解剖尸体,观察肝脏肿瘤生长状况。所有可疑组织均做好标记,拍照。图2为裸鼠HepG2-luc细胞肝脏原位注射4周后肝脏图。

     

而裸鼠皮下成瘤实验只需将标准条件下培养的处于对数生长期的HepG2细胞消化、离心,将所得的约5×106个细胞溶于 0.1 mL DMEM培养液,注射于裸鼠右侧背部皮下即可。选择的裸鼠一般在4-6周龄,体重15-20g左右,接种时,针头在皮下进针深一点,约25px深,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块,四周左右出现皮下成瘤。图3为裸鼠HepG2细胞皮下注射4周后裸鼠图

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