肌酸激酶B(CK-BB)活性蛋白
实验原理:
肌酸激酶BB(CK-BB)是一种肌酸激酶。CK-BB由两个完全相同的脑型CKB亚单位组成的同二聚体,是一种参与细胞能量稳态的细胞质酶,其某些部分与细胞膜、ATP酶和细胞内多种需要ATP的酶结合。此外,肌酸激酶M(CKM)已被鉴定为CKB的相互作用因子。本实验通过结合ELISA检测重组人CK-BB和重组人CKM的相互作用。
实验试剂:
APC030Hu01 Active Creatine Kinase B (CK-BB)
实验方法:
用含有0.01% BSA的PBS(pH 7.4)梯度稀释CK-BB。将100μL样品移入CKM蛋白预包被酶标板中,37℃孵育2小时。弃去孔内液体,用PBST洗涤。除去洗液,加入抗CK-BB pAb孵育1小时,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。用辣根过氧化物酶标记的二抗孵育后,弃去孔内液体,用PBST洗板3次。加入底物溶液后,在37℃下孵育15-25分钟。最后,向孔中加入50μL终止液,立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度。CK-BB和CKM的结合活性如图1所示,这种作用呈剂量依赖性。
实验结果:
图1. CK-BB与CKM的结合活性。
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